Alimentos Transgénicos

Humanized Mouse Model to Study Type 1 Diabetes (1)

- Tipos de ATs :

    1. ratones  SI ---- Knockout 

    2. ratones HLA-A / HLA-DQ8 ---- Knockout.

- Método de Obtención: 

    1.Cruce de ratones mINS -/- con HLA-A* transgénico.

    2. Cruce de transgénico H-2D  mB2m con IA IE doble ratones knockout HLA-DQ8.

- Usos

    - Establecer nuevos biomarcadores de diagnóstico.

    - Diseñar terapias específicas de antígeno para prevenir el desarrollo de T1D

Ventajas (2)

1. Los alimentos transgénicos contiene mayor contenido de vitaminas, minerales y aminoácidos pero con menor cantidad de ácidos grasos saturados.

2. Debido a alteraciones genéticas, por ejemplo del gen que codifica pectinesterasa, los alimentos transgénicos se conservan más tiempo.

3. Los cultivos de alimentos transgénicos se caracterizan por tener un mayor rendimiento y por ende mayor producción a un costo menor que el convencional beneficiando así a la economía de los agricultores.

4. Ayudan en el cuidado del suelo, ya que se necesita menos espacio para producir una mayor cantidad. Entonces disminuye la sobreexplotación que puede darse en el suelo por cultivos convencionales.

5. Los cultivos de alimentos transgénicos necesitan una menor aplicación de plaguicidas sobre ellos, por los que reducen la contaminación o intoxicación de estos.

Desventajas (2)

1. Se desconoce el impacto medioambiental futuro que puede causar el cultivo de plantas transgénicas, aunque ya existe evidencia sobre la pérdida de biodiversidad.

2. La inserción errónea de ADN dentro del genoma puede tener efectos graves sobre la producción de proteínas normales.

3. El ADN que se insertará a la planta puede estar sujeto a contaminación o sobreexpresión, que se relaciona con la producción de dosis mayores de sustancias tóxicas que darían origen a nuevas alergias alimentarias.

4. Si en el material genético de la planta existe alguna mutación, pueden verse afectadas las vías metabólicas de esta, por lo que existe la posibilidad de una disminución en la cualidad nutritiva del alimento.

5. Existe riesgo de la transferencia de genes exógenos desde una variedad transgénica a variedades silvestres del mismo entorno.

Referencias:

1. Sandrine L, Guinoiseau S, Gadault A, Letourneur F, Blondeau B, Nitschke P et al. Humanized Mouse Model to Study Type 1 Diabetes. Diabetes [Internet]. 2018 [cited 30 July 2022];67(9). Available from: https://diabetesjournals.org/diabetes/article/67/9/1816/15951/Humanized-Mouse-Model-to-Study-Type-1-Diabetes

2. Serrano L. Alimentos transgénicos. Ventajas e inconvenientes de su producción y consumo. Revista Electrónica de PortalesMedicos :Endocrinología y Nutrición [Internet]. 2022 [cited 29 July 2022];17(4). Available from: https://www.revista-portalesmedicos.com/revista-medica/alimentos-transgenicos-ventajas-e-inconvenientes-de-su-produccion-y-consumo/

ADN recombinante artificial y natural

 ADN recombinante en Diabetes Tipo 1 (Proteínas artificiales recombinantes)

Tema: Amelioration of type 1 diabetes by recombinant fructose-1,6-bisphosphate aldolase and cystatin derived from Schistosoma japonicum in a murine model.

Objetivo: Terapia

Gen: Gen de fructose-1,6-bisphosphate aldolase y Gen de cystatin

Vector: pEt-28arSjcystatin o pET-28a-rSjFBPA

Célula receptora: Células T reguladoras y E. coli DE3

Mecanismo de transferencia o inserción del gen: Transfección y transformación por conjugación bacteriana

Métodos de identificación de clones:

- Cultivo + IPTG

- Productos del gen: Electroforesis con dodecilsulfato de sodio para proteínas, citometría, ELISA, inmunohistoquímica (1).

ADN recombinante en Bacterias (natural)

Parte de los genes destinados a la supervivencia bacteriana se relacionan con los plásmidos. Los plásmidos presentan una clasificación bien definida en la que destacaremos a los relacionados con la virulencia ya que estos contienen genes de resistencia hacia antibióticos y pueden trasmitirse a otras bacterias de la misma colonia por medio de pilis sexuales (2).

Referencias

- 1. Yang K, Zhou H, Luo Q, Shen J, Xu Y, Zhong Z. Amelioration of type 1 diabetes by recombinant fructose-1,6-bisphosphate aldolase and cystatin derived from Schistosoma japonicum in a murine model. Parasitol Res [Internet]. 2019 [cited 23 July 2022];119. Available from: https://link.springer.com/article/10.1007/s00436-019-06511-7

(para leer el artículo s00436-019-06511-7.pdf)

2. Hernández K. Plásmidos Bacterianos. Saber más - Revista de divulgación [Internet]. 2022 [cited 24 July 2022];. Available from: https://www.sabermas.umich.mx/archivo/articulos/283-numero-33/510-plasmidos-bacterianos.html

Western Blot para proteínas involucradas en la regulación mitocondrial de Fibrosis Quística

Mediante Western Blot (WB) se analizó la expresión y activación de la proteína DRP1  en tres tipos celulares (IB3-1, S9 Y C38). Esta proteína se encuentra relacionada con la fisión mitocondrial y es dependiente de la actividad CFTR. Cada una de estas células proponen una activación diferente de DRP1 en condiciones basales, sin embargo en estimulo con AMPc existe disminución de la expresión de DRP1 1. Además, el WB puede utilizarse para medir los niveles de expresión de interleucina proinflamatoria IL-8. 2

Referencias

1. Fadulti C. ANÁLISIS DE LA MORFOLOGÍA MITOCONDRIAL EN FIBROSIS QUÍSITICA [Internet]. BIOMED, CONICET-UCA; 2021 [cited 17 July 2022]. Available from: https://repositorio.uade.edu.ar/xmlui/bitstream/handle/123456789/13727/Proyecto%20Final_Camila%20Falduti_AN%c3%81LISIS%20DE%20LA%20MORFOLOG%c3%8dA%20MITOCONDRIAL%20EN%20FIBROSIS%20QU%c3%8dSITICA.pdf?sequence=2&isAllowed=y

2. Escobar B, Tamajón S, Gallego M, Jiménez R. Estrategia terapéutica basada en análogos de ANXA1 para el tratamiento de la fibrosis quística. SECUAH [Internet]. 2021 [cited 17 July 2022];10(1). Available from: https://secuah.web.uah.es/2021/articles/dianas_2021_10_1_e202103fa04_escobar-doncel_etal.pdf

Extracción de ADN de Mycoplasma Pneumoniae y Chlamydia Pneumoniae en PCR

Objetivo: Evaluar la PCR como herramiento para el diagnóstico de infecciones por M. pneumoniae y C. pneumoniae 

Muestras: Sangre periférica (106 muestras en total)

Extracción de ADN: Wizard Genomic DNA Purification Kit (Promega)

Ácido nucleico: ADN bacteriano

Genes a amplificar (con pb):  (figura A)

    - Genes 16S rRNA de M. pneumoniae = 700 pb

    - ompA para C. peumoniae = 333 pb

    - mip (gen potenciador de infección de macrófagos) = 233 pb

    - gen de ATPasa para M. neumoniae = 143 pb 

Tipo de PCR: Multiplex 

Pasos de la PCR:

    - Desnaturaliación por 1 minuto a 94°C

    - Hibridación por 1 minuto a 58°C

    - Extensión por 1 minuto a 70°C

    - Extensión final 9 minutos 

Electroforesis: gel de agarosa al 2%.

Referencias

1. Campos Y, Thula L, Cuervo M, Serrano C, Quintero Y, Ocando T. REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR), PARA ELDIAGNÓSTICO DE MYCOPLASMA PNEUMONIAE Y CHLAMYDIA PNEUMONIAE EN SANGRE. CECAVI [Internet]. 2019 [cited 10 July 2022];8(1). Available from: http://revistas.uam.edu.pa/index.php/revistacecavi/article/view/17/6

Alteraciones de la Epigenómica en la vía de señalización NOTCH relacionada con Síndrome de Hajdu-Cheney

La sumoilación, modificación de  histonas por adición de ubiquitina, regula la actividad de componentes nucleares alterando la vía de señalización Notch que presenta alta sensibilidad ante modificaciones en  histonas y  cromatina. Como resultado existe ausencia del dominio PEST, encargado de la regulación de Notch, por a una mutación en el exón34 de NOTCH2 que causa batrocefalia con occipucio prominente,, cardiopatías congénitas, malformacioones respiratorias o digestivas,etc.

1. Taboada N, Herrera M. Mecanismos epigenéticos y vía de señalización Notch en el origen de diferentes defectos congénitos. Medicentro Electrónica [Internet]. 2018 [cited 3 July 2022];22(3). Available from: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1029-30432018000300002