Extracción de ADN de Mycoplasma Pneumoniae y Chlamydia Pneumoniae en PCR

Objetivo: Evaluar la PCR como herramiento para el diagnóstico de infecciones por M. pneumoniae y C. pneumoniae 

Muestras: Sangre periférica (106 muestras en total)

Extracción de ADN: Wizard Genomic DNA Purification Kit (Promega)

Ácido nucleico: ADN bacteriano

Genes a amplificar (con pb):  (figura A)

    - Genes 16S rRNA de M. pneumoniae = 700 pb

    - ompA para C. peumoniae = 333 pb

    - mip (gen potenciador de infección de macrófagos) = 233 pb

    - gen de ATPasa para M. neumoniae = 143 pb 

Tipo de PCR: Multiplex 

Pasos de la PCR:

    - Desnaturaliación por 1 minuto a 94°C

    - Hibridación por 1 minuto a 58°C

    - Extensión por 1 minuto a 70°C

    - Extensión final 9 minutos 

Electroforesis: gel de agarosa al 2%.

Referencias

1. Campos Y, Thula L, Cuervo M, Serrano C, Quintero Y, Ocando T. REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR), PARA ELDIAGNÓSTICO DE MYCOPLASMA PNEUMONIAE Y CHLAMYDIA PNEUMONIAE EN SANGRE. CECAVI [Internet]. 2019 [cited 10 July 2022];8(1). Available from: http://revistas.uam.edu.pa/index.php/revistacecavi/article/view/17/6